實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

髓核是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環之間。由縱橫交錯的纖維網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。

髓核細胞的過早衰老與凋亡是導致椎間盤退行性變過程的主要原因之一，主要表現為退變椎間盤內髓核細胞功能降低和數量減少，使得其 Ⅱ型膠蛋白聚糖等基質分泌量下降，終導致椎間盤維持脊柱高度、承受各方應力等生物力學功能喪失。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常椎間盤組織。

2)細胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：梭形或多角形細胞，不規則細胞，貼壁培養。

推薦培養基：

我們推薦使用 DELF 原代 軟骨 細 胞培養體系 作為體外培養的培養基。

公司正在出售的產品：

小鼠酶2(CA-2)ELISA 試劑盒

Rat activated protein C (APC) ELISA Kit 大鼠活化蛋白C(APC)檢測試劑盒

HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21BELISAKit 人細胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)檢測試劑盒 進口分裝

Cobravenomfactor,CVF檢測試劑盒毒蛇因子(CVF)檢測試劑盒

載玻片細胞鈣ATP酶SERCA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

Mouseendotoxin,ETELISAKit小鼠內毒素(ET)檢測試劑盒

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

SDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1 0.5mgSDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 標簽) Protein

AMBP Protein Human 重組人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (His 標簽)

IL1RAPL2 Protein Human 重組人 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白

SDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1 0.5mgSDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子1

AMBP Protein Human 重組人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 蛋白 (His 標簽)

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

IL1RAPL2 Protein Human 重組人 IL-1R9 / IL1RAPL2 蛋白

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 (His 標簽) Protein

豬膽囊收縮素/腸促肽(CCK)ELISA 試劑盒

Human macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)檢測試劑盒

Porcinemelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit 豬黑色素瘤轉移表面黏附分子(MMSAM)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha1-MGELISAKit大鼠α1微球蛋白

血液0酸二酯酶1(PDE1)活性酶連續循環光譜法定量檢測試劑盒10次

Mouseβ-galactosidase,βGALELISAKit小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)檢測試劑盒

兔髓核細胞豬α葡萄糖苷酶（α-Glu）檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬α干擾素(IFN-α)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬α干擾素(IFN-α)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬S-100B蛋白（S-100B）檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。