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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

腦血管周細胞分布于腦組織的微血管系統(tǒng)中，調節(jié)血管形成、穩(wěn)定和功能的關鍵因素。周細胞典型的特征是有一個突出的核，核周圍胞漿較少，有許多平行于微血管長軸的突起，這些突起逐漸變細并包繞微血管腔，起到對管腔的支持作用。同時，一個周細胞可以通過伸展的突起與微循環(huán)中的多個接觸。此外，周細胞和內皮細胞間的相互作用在血管新生中具有極為重要的作用。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常腦組織。

2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 周 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3（TRAIL-R3）elisa檢測試劑盒

ISLR2蛋白抗體

ISLR2

碳酸酐酶6抗體

CA6

透射電鏡（TEM）鎳質載網(wǎng)

人GTP酶NRas(NRAS)elisa分析檢測試劑盒

大鼠Toll樣受體4（TLR-4）elisa檢測試劑盒

小鼠溶血?；D移酶3(LPCAT3)elisa檢測試劑盒

轉移相關蛋白2抗體

MTA2

FAM101B蛋白抗體

FAM101B

微管蛋白β tubulin抗體 Tubulin β  Anti-tubulin Beta

環(huán)指蛋白139抗體  Anti-RNF139

膜相關蛋白Numb抗體  Anti-NUMB

鞘氨醇激酶1抗體  Anti-SPHK1

人水痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體

VZV gE

細胞遷移誘導蛋白19抗體

NBR1

細胞S期激酶相關蛋白2抗體  Anti-SKP2/skp2 p45

核因子κB抑制蛋白α抗體  Anti-NFKBIA/IKB alpha

磷酸化減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體  Anti-phospho-REC8(Ser251)

味覺受體蛋白家族2亞基16抗體  Anti-TAS2R16

大鼠分泌型球蛋白A(sIgA)elisa分析檢測試劑盒

KIAA1841蛋白抗體

KIAA1841

染色質修飾蛋白1B抗體

兔腦血管周細胞CHMP1B

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。