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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

Cajal間質(zhì)細胞以網(wǎng)絡(luò)狀分布在消化道腸神經(jīng)系統(tǒng)末梢與平滑肌細胞之間的一類特殊細胞。胃腸道運動功能的產(chǎn)生和維持是Cajal間質(zhì)細胞、腸神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌細胞三者協(xié)同作用的結(jié)果。間質(zhì)細胞不僅能自發(fā)產(chǎn)生節(jié)律性慢波，而且能介導(dǎo)腸神經(jīng)系統(tǒng)與平滑肌間的信號調(diào)節(jié)。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常腸組織。

2)細胞鑒定：c-kit熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 間質(zhì) 細 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人P0蛋白抗體(IgM)elisa分析檢測試劑盒

Leishmanolysin樣肽酶抗體

Invadolysin

轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體

AP2 alpha

細胞GSK-3ALPHA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒

牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)elisa分析檢測試劑盒

阿魏酸含量試劑盒

小鼠金屬硫蛋白1(MT1)elisa檢測試劑盒

MRVI1蛋白抗體

MRVI1

20號染色體開放閱讀框187抗體

C20orf187

線粒體硫氧還蛋白2抗體  Anti-Thioredoxin 2

Ras樣蛋白A+B抗體  Anti-RALA+RALB

死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體  Anti-NRH2

轉(zhuǎn)錄因子SOX-11蛋白抗體  Anti-SOX11

泛素結(jié)合酶UFC1抗體

UFC1

防御素β-127/β-defensin 127抗體

DEFB127

電壓開啟的鈉離子通道SCN9A抗體  Anti-SCN9A/NAV1.7

磷酸化核因子活化T細胞胞漿蛋白2抗體  Anti-phospho-NFATc2(Ser326)

蛋白酶調(diào)解因子10抗體  Anti-PSMD10

微管蛋白聚合促進蛋白24  Anti-TPPP

大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白11(IP-11/CXCL11)elisa分析檢測試劑盒

血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa生化檢測試劑盒

SAA ELISA Kit

人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)elisa生化檢測試劑盒

兔腸間質(zhì)細胞HumanPIF/DCDELISAKit

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。