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細(xì)胞簡介：

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時，身體機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，同時它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞，適宜大規(guī)模培養(yǎng)，對機(jī)體損傷小等優(yōu)點(diǎn)，而且其來源廣泛，體內(nèi)儲備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來新的研究熱點(diǎn)之一。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于手術(shù)取得的正常人脂肪組織。

2)細(xì)胞鑒定：CD44熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠卵白蛋白(OVA)elisa檢測試劑盒

大鼠β防御素2(DEFB2)elisa檢測試劑盒

小鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)elisa檢測試劑盒

人5-核苷酸酶elisa檢測試劑盒

通用型血液對氧磷酶1（PON1）有機(jī)磷酸酶活性熒光定量檢測試劑盒

大鼠緩激肽(BK)elisa檢測試劑盒

尿酸含量測試盒

人核糖體合成蛋白NSA2源物(NSA2)elisa分析檢測試劑盒

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶2C19（S-MEPHENYTOIN）

鋅指蛋白22抗體 ZNF22

鋅指蛋白620抗體 ZNF620

表皮生長因子受體重組兔單克隆抗體 EGFR

叉頭蛋白O6抗體 FOXO6

DNAJA4蛋白抗體 DNAJA4

DZANK1蛋白抗體 DZANK1

磷酸化非受體型蛋白激酶Tnk1抗體 Phospho-TNK1 (Tyr277)

磷酸化磷脂酰肌醇激酶調(diào)節(jié)亞單位gamma抗體 phospho-PIK3R3 (Tyr199)

轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體 TNPO3

組蛋白賴特異性脫甲基酶1抗體 KDM1/LSD1

核酸內(nèi)切酶源蛋白MUS81抗體 Mus81

黑色素瘤相關(guān)抗原E1抗體 MAGEE1

OS-9蛋白抗體 OS9

PE-Cy5標(biāo)記人CD25單克隆抗體 human CD25/PE-Cy5

神經(jīng)節(jié)苷酯抗體 ganglioside GM1

生長抑制DNA損傷基因45抗體 GADD45A

熒光細(xì)胞流式儀間接檢測試劑盒（含熒光二抗）

大鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa生化檢測試劑盒

C4 ELISA Kit

人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)elisa生化檢測試劑盒

人脂肪干細(xì)胞COLEC11ELISAKit