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細(xì)胞簡介：

主動脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動脈之間，抑制射入主動脈的血液回流入左心室。

主動脈瓣鈣化可引起主動脈瓣狹窄關(guān)閉不全等，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。

細(xì)胞特性：

1） 組織來源于實驗動物的正常主動脈組織。

2） 細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5） 細(xì)胞生長方式：長梭形、不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代間質(zhì) 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠骨形成蛋白6(BMP6)elisa檢測試劑盒

KRI1蛋白抗體

KRI1

巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS6抗體

BBS6

食物脂質(zhì)過氧化氫（H2O2）活性比色法定量檢測試劑盒

過氧化氫H2O2測試盒 50管/48樣

小鼠促黃體(LH)elisa檢測試劑盒

E3泛素連接酶蛋白NEURL1B抗體

NEURL1B

7號染色體開放閱讀框13抗體

C7orf13

糖皮質(zhì)誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體抗體  Anti-TNFRSF18/GITR

磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體  Anti-PIK3CA

少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1  Anti-OLIG1

鈉通道亞基β4抗體  Anti-SCN4B

神經(jīng)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子DAT1抗體

DAT1/LIM domain only 3

DNAJC17蛋白抗體

DNAJC17

磷酸化鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體  Anti-phospho-VAV1(Tyr174)

指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體  Anti-Noggin

受體轉(zhuǎn)運蛋白3抗體  Anti-RTP3

腺泡狀軟組織肉瘤結(jié)構(gòu)域蛋白ASPC抗體  Anti-TUG/ASPC

大鼠白介素5(IL-5)elisa分析檢測試劑盒

魚催乳素(PRL/LTH)elisa生化檢測試劑盒

PRL/LTH ELISA Kit

人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)elisa生化檢測試劑盒

大鼠主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞HCV-IgMELISAKit