細胞簡介：

脾是重要的器官，有造血、濾血、衰老血細胞及參與反應等功能。也是細胞遷移和接受抗原刺激后發(fā)生應到、產(chǎn)生效應分子的重要場所。

內(nèi)皮祖細胞具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細胞，缺乏成熟內(nèi)皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結構。其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物小鼠的正常脾臟組織。

2)細胞鑒定：CD31或CD34熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF原代 內(nèi)皮祖 細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠葡萄糖激酶(GK)elisa檢測試劑盒

大鼠白介素5（IL－5）elisa檢測試劑盒

小鼠Ⅷ(F8)elisa檢測試劑盒

人CD19分子(CD19)elisa分析檢測試劑盒

細胞基質(zhì)金屬（MMP-2）琥珀酰明膠法比色定量檢測試劑盒

大鼠型纖溶酶原激活因子 uPA elisa檢測試劑盒

人體血小板粗提分離試劑盒

土壤羥胺還原酶（HR）測試盒

通用型密執(zhí)歲棍狀桿菌棋盤亞種Clavibacter michiganensis subsp. Tessellarius；CMT）基因檢測試劑盒

鋅指蛋白537抗體 ZNF537

鋅指蛋白835抗體 ZNF835

層粘連蛋白B2γ1抗體 Laminin B2 gamma 1

核糖基轉移酶1單克隆抗體 HPRT1

DPM1蛋白抗體 DPM1

ELAVL1抗體 ELAVL1

磷酸化激酶C-SRC抗體 phospho-CSK (Ser364)

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2重組兔單克隆抗體 Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222)

組蛋白H3K9甲基轉移酶4抗體 SETDB1/KMT1E

12號染色體開放閱讀框24抗體 C12ORF24

黑色素瘤蛋白多糖4抗體 NG2

環(huán)指蛋白156抗體 RNF156

PDLIM2蛋白抗體 PDLIM2

PerCP-Cy5.5標記人HLA-DR單克隆抗體 human HLA-DR/PerCP-Cy5.5

神經(jīng)細胞特異性轉錄因子LDB1抗體 LDB1

雙甲基精水解酶2抗體 DDAH2

冰凍切片制片預處理脫水液

鞘氨醇激酶2抗體  Anti-SPHK2

PE標記的兔抗人IgM

Rabbit Anti-Human IgM / PE

小鼠脾源性內(nèi)皮祖細胞DNA切除修復蛋白1抗體