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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Hoechst 33342

產(chǎn)品中文名稱：Hoechst 33342

規(guī)格：10mg/100 mg

貨號(hào)：EY-01X8565
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•   λEx/λEm: 350/461 nm(結(jié)合DNA)，346/460 nm(未結(jié)合DNA)。

產(chǎn)品形式黃色固體

使用中注意事項(xiàng)•  可溶于水。

保存建議:-20℃，避光保存12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

Hoechst 33342是一種非嵌入性的亮藍(lán)色熒光染料。Hoechst染料在細(xì)胞周期和凋亡研究中被廣泛應(yīng)用，也被廣泛應(yīng)用于核復(fù)染色。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Adropin蛋白(AD)重組蛋白 Recombinant Adropin (AD)

FGF21 Protein Human 重組人 FGF21 蛋白 (His 標(biāo)簽)

AGRP重組小鼠 AGRP / AgRP 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

TNF Protein Rat 重組大鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

CCDC47重組人 CCDC47 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA 試劑盒

Rat thrombin aithrombin complex (TAT) ELISA Kit 大鼠抗復(fù)合物(TAT)檢測(cè)試劑盒

HumanBigEndothelin,BigETELISAKit 人大內(nèi)皮素(BigET)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanATP-bindingcassetteanspoerG2,ABCG2檢測(cè)試劑盒人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2(ABCG2)檢測(cè)試劑盒

植物源性食品腰果(cashew)試劑盒20次

HumahromboxaneA2,TX-A2ELISAKit人血栓素A2(TX-A2)檢測(cè)試劑盒

C（VC）檢測(cè)   Vitamin B2 (VB2) detection

B1（VB1）檢測(cè)   The total amino acid (TAA) detection

B2（VB2）檢測(cè)   Detection of malic dehydrogenase

總基酸（T－AA）檢測(cè)   Hydroxyproline sample preeatme

大鼠無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(W5A)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： W5A ELISA Kit

Mouse eosinophil chemotactic protein Eotaxin 1 (Eotaxin 1/CCL11) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)檢測(cè)試劑盒

MouseCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISAKit 小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHSP-20ELISAKit大鼠熱休克蛋白20

細(xì)胞MSK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-12/P40大鼠白介素12

Hoechst 33342AGRP重組小鼠 AGRP / AgRP 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Adropin蛋白(AD)重組蛋白 Recombinant Adropin (AD)

CCDC47重組人 CCDC47 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FGF21 Protein Human 重組人 FGF21 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TNF Protein Rat 重組大鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白