產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：SuperKine•  Enhanced Antifade Mounting Medium

產(chǎn)品中文名稱：SuperKine•  增強型抗熒光淬滅劑

規(guī)格：10 mL/50 mL

貨號：EY-01X8578
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

•  抗熒光淬滅效果強：封片后避光保存2周以上，仍可維持原有發(fā)光強度；

•  兼容性好：精心優(yōu)化的配方可兼容多種熒光染料

•  操作便捷：即用型，無需配置。

保存建議:-20℃，避光保存12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

由于光照、pH值及溫度等環(huán)境影響，或熒光分子和其它分子相互作用等因素，造成的熒光分子的不可逆破壞即為熒光淬滅。熒光淬滅導(dǎo)致用熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察時，可見的信號減弱。抗熒光淬滅劑用于對熒光組織和細胞樣品的封片，防止熒光淬滅。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導(dǎo)表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Alpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原 0.5mgAlpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原)

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mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

小鼠粒細胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D

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HumanAbnormalprothrombin,APT檢測試劑盒人異常原(APT)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常女性人體肝組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

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SuperKine•  增強型抗熒光淬滅劑EGFR重組小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

半乳糖凝集素9(GAL9)重組蛋白 Recombinant Galectin 9 (GAL9)

LYZL2重組人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 Protein

CDON Protein Human 重組人 CDON / CDO 蛋白

IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白