產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human DKK-1 Protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）

規(guī)格：10 μg/500 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8725
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來(lái)源于： 表達(dá)人DKK-1 (Thr32-His266) (O94907)。

蛋白長(zhǎng)度：重組人DKK-1由235個(gè)氨基酸組成，預(yù)測(cè)分子量為25.8 kDa。

純度:> 98 %，使用SDS-PAGE檢測(cè)

通過(guò)LAL法測(cè)定，每微克蛋白里內(nèi)毒素含量<1 EU。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無(wú)菌的PBS.

基因ID:22943

使用中注意事項(xiàng):開(kāi)蓋使用前，請(qǐng)先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用該產(chǎn)品配套的Reconstitution Buffer進(jìn)行復(fù)溶，且濃度不低于1動(dòng)?動(dòng)

背景

Human DKK-1 (Dickkopf related protein 1) is a secreted antagonist of Wnt/beta-Catenin signaling. It interacts with LRP-6, and internalized complexes of DKK-1/LRP-6/Kremen 2 can downregulate Wnt signaling. The balance between Wnt signaling and Human DKK-1 inhibition is critical for bone formation and homeostasis. In addition, Human DKK-1 can act as either a tumor suppressor or promoter of metastasis.

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

小鼠羧甲基賴酸(CML)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)檢測(cè)試劑盒

HumanIerleukin1βconveingenzyme,ICEELISAKit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶(ICE)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3檢測(cè)試劑盒胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠廋素   英文名稱：   Leptin   規(guī)格：      英文縮寫：   Leptin

小鼠廋素受體   英文名稱：   Leptin receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   Leptin R

小鼠促黃體生成激素   英文名稱：   leinizing hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   LH

小鼠   英文名稱：   Lysozyme   規(guī)格：      英文縮寫：   Lysozyme

大鼠生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6(GAS6)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GAS6 ELISA Kit

Mouse vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 小鼠3(VD3)檢測(cè)試劑盒

RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHD(MouseHistoneDeacetylase)ELISAKit小鼠組織蛋白去乙酰化酶

細(xì)胞TUNEL顯色法(DAB)測(cè)定試劑盒10/20次

ELISAKitLCA扁豆凝集素

重組人Dickkopf相關(guān)蛋白1（DKK-1）IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。