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本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Mouse IL-25 Protein, His tag (Animal-Free)

產(chǎn)品中文名稱：重組小鼠白介素-25，His-標(biāo)簽無動物源IL-25

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8806
用途：僅供科研研究實驗

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:小鼠

序列:氨基酸序列來源于：小鼠白介素-25（Val 17-Ala 169）。

活性:通過其誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞分泌CXCL1的能力來衡量。這種效應(yīng)的 ED50<1 ng/mL。

純度:>98%，使用SDS-PAGE檢測

通過LAL法測定，每微克蛋白里內(nèi)毒素含量<0.1 EU。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的20 mM sodium citrate, 0.2 M NaCl, pH 4.5

使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心。本產(chǎn)品為凍干粉，推薦用該產(chǎn)品配套的Reconst動?動

背景

白細(xì)胞介素25(IL-25)是一種具有促炎和抗炎作用的細(xì)胞因子，其分子量約為16.7 kDa。它能誘導(dǎo) NF-κB 活化，刺激中性粒細(xì)胞主要趨化物質(zhì) IL-8的產(chǎn)生。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1 0.5mgCDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依賴性激酶1抗原

BCL2L1 Protein Human 重組人 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ALCAM重組小鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

SFRP1 Protein Mouse 重組小鼠 sFRP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

OLR1重組人 OLR1 / LOX1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

病毒(CSFV)檢測試劑盒

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Rabbitprolactin,PRLELISAKit 兔子催乳素(PRL)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforANNA-2/Ri(Humanneuronalnuclearaoaibody)ELISAKit人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體

血液二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50次

Porcinegrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit豬促生長激素釋放激素(GHRH)檢測試劑盒

豬細(xì)胞色素氧化酶（CC0）檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬戊型肝病毒IgG(HEV-IgG)檢測試劑盒      試劑盒   組裝/原裝

大鼠白介素1α(IL-1α)檢測試劑盒 ，英文名： IL-1α ELISA Kit

Rabbit maix metalloproteinase 5 (MMP-5) ELISA Kit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)檢測試劑盒

ELISA 小鼠白介素-17(mouse IL-17)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-3(HumanIerleukin3)ELISAKIT人白介素3

通用型雞馬立克氏病Marek’sdiseasevirus(MDV)試劑盒20次

ELISAKitypsin大鼠

重組小鼠白介素-25，His-標(biāo)簽無動物源IL-25ALCAM重組小鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1 0.5mgCDK1 (Cyclin-Dependent Kinase 1) 周期素依賴性激酶1抗原

OLR1重組人 OLR1 / LOX1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BCL2L1 Protein Human 重組人 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SFRP1 Protein Mouse 重組小鼠 sFRP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷