實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

大鼠腸動脈內(nèi)皮分離自腸動脈；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng)。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腸動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腸動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠A(CsA)檢測試劑盒 ，英文名： CsA ELISA Kit

Rabbit ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 兔抗平滑肌抗體(ASMA)檢測試劑盒

登革熱病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T

CLIAKitformouseIgAELISAkit小鼠免疫球蛋白IgA

體液環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKiX人Ⅰ型膠原N末端肽

FGFR4重組大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS 1mgGRGDS peptide 粘附多肽GRGDS

CHI3L2重組人 CHI3L2 / YKL-39 蛋白 Protein

CANT1 Protein Human 重組人 CANT1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FGF21 Protein Mouse 重組小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋白

GRGDS peptide 粘附多肽GRGDS 1mgGRGDS peptide 粘附多肽GRGDS

CANT1 Protein Human 重組人 CANT1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

FGFR4重組大鼠 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

FGF21 Protein Mouse 重組小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 蛋白

CHI3L2重組人 CHI3L2 / YKL-39 蛋白 Protein

鴨白介素1(IL-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuronal nuclear aibody type 1 / ai Hu aibody (ANNA-1/Hu) ELISA Kit 人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)檢測試劑盒

Humanansferrieceptor,TFRELISAKit 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAChRabELISAKit大鼠乙酰受體抗體

洋蔥培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

MousePhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞羊促卵泡素(FSH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

羊促黃體激素(LH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

羊雌三醇(E3)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

羊雌激素(E)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝