細(xì)胞簡介：

大鼠腸系膜平滑肌分離自腸系膜動(dòng)脈組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中最長的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)纬杉S便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng)。腸系膜動(dòng)脈由背大動(dòng)脈發(fā)出的走行在腸系膜內(nèi)，分布于消化管的動(dòng)脈。分成腸系膜上動(dòng)脈和腸系膜下動(dòng)脈。前者主要分布于小腸左側(cè)，后者分布于結(jié)腸、大腸、泄殖腔等處。腸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腸系膜平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腸系膜平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠腸系膜平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠原C(PGC)檢測試劑盒 ，英文名： PGC ELISA Kit

Mouse aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白5(AQP-5)檢測試劑盒

Mouseansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISAKit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhs-CRPELISAKit大鼠超敏C反應(yīng)蛋白

細(xì)胞NEK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitβOHB大鼠β

F7重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原

DUSP14重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

GPR56 Protein Human 重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白

CCR-4(C-C chemokine receptor 4 0.5mgCCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細(xì)胞表面趨化因子受體4抗原

GPR56 Protein Human 重組人 GPR56 / TM7LN4 蛋白

F7重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

CCL3 Protein Rat 重組大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白

DUSP14重組人 DUSP14 / MKP-6 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat retinol binding protein 4 (RBP-4) ELISA Kit 大鼠結(jié)合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒

HumanC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-ⅠELISAKit 人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanChlamydiapneumoniaeaibody,Cpn-Ab檢測試劑盒人肺衣原體抗體(Cpn-Ab)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米T14品系試劑盒20次

Humanselenoprotein1,SEP1ELISAKit人硒蛋白1(SEP1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腸系膜平滑肌細(xì)胞兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。