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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠肌腱成纖維分離自肌腱組織；肌腱是肌腹兩端的索狀或膜狀致密結締組織，便于肌肉附著和固定。一塊肌肉的肌腱分附在兩塊或兩塊以上的不同骨上，是由于肌腱的牽引作用才能使肌肉的收縮帶動不同骨的運動。每一塊骨骼肌都分成肌腹和肌腱兩部分，肌腹由肌纖維構成，色紅質軟，有收縮能力，肌腱由致密結締組織構成，色乳白較硬，沒有收縮能力。肌腱把骨骼肌附著于骨骼。長肌的肌腱多呈圓索狀，闊肌的肌腱闊而薄，呈膜狀，又叫腱膜。此處的肌腹即為通常所說的紅肌，而肌腱即為白肌，分別控制肌肉的力量、爆發(fā)力和耐力。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肌腱成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠肌腱成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠肌原纖蛋白1(FBN1)檢測試劑盒 ，英文名： FBN1 ELISA Kit

Mouse histone deacetylase (HD) ELISA Kit 小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)檢測試劑盒

RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISAKit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFXELISAKit大鼠Ⅹ

細胞精(arginine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISAKit大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein

Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)

CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)

Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原 0.5mgAnnexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

EPHA7重組小鼠 EphA7 / EHK-3 蛋白 Protein

REG1A Protein Rat 重組大鼠 REG1A / PSPS 蛋白 (Fc 標簽)

CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 Protein

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白A(IgA)檢測試劑盒

humanProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit 人前列腺素E1(PGE1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-parotidductaibody檢測試劑盒人抗腮腺管抗體(ai-parotidductAb)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細胞壁束縛酸性蔗糖轉化酶(acidinvease)活性比色法定量檢測試劑盒(胞壁)20次

Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains1,Tie1ELISAKit人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶1(Tie1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠肌腱成纖維細胞小鼠α半乳糖基抗原檢測試劑盒   小鼠α半乳糖基抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠α半乳糖基抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α半乳糖基抗原試劑盒、小鼠α半乳糖基抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠αN已?；咸擒彰笝z測試劑盒   小鼠αN已酰基葡糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αN已?；咸擒彰冈噭┖?，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αN已?；咸擒彰冈噭┖?、小鼠αN已?；咸擒彰?span>eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠αL巖藻糖苷酶檢測試劑盒   小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αL巖藻糖苷酶試劑盒、小鼠αL巖藻糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

小鼠αL艾杜糖苷酸酶檢測試劑盒   小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αL艾杜糖苷酸酶試劑盒、小鼠αL艾杜糖苷酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。