實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠腎小球系膜分離自腎小球組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球系膜是位于腎小球毛細血管袢之間的一種特殊間充質(zhì)，由系膜細胞和系膜基質(zhì)組成。腎小球系膜細胞是腎小球內(nèi)非常活躍的細胞，具有分泌細胞基質(zhì)、產(chǎn)生細胞因子、吞噬和清除大分子物質(zhì)及類似平滑肌細胞收縮的功能。腎小球系膜細胞增生和基質(zhì)的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細胞的培養(yǎng)是研究系膜擴張、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法。系膜細胞的主要作用可能有：①收縮作用，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調(diào)節(jié)，以影響毛細血管袢的內(nèi)壓和濾過率；②支持作用，它填充于毛細血管袢之間，支持毛細血管的位置；③吞噬作用，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質(zhì)和蛋白質(zhì)；④分泌腎素，在腎缺血或免疫復合物沉積時，系膜細胞增生且分泌腎素。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腎小球系膜采用機械研磨法結合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腎小球系膜經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠   英文名稱：   Cytochrome C   規(guī)格：      英文縮寫：   Cytochrome C

小鼠超敏C反應蛋白   英文名稱：   Mouse C Reactive Protein HS   規(guī)格：      英文縮寫：   CRP-hs

小鼠鈣蛋白   英文名稱：   Mouse Calprotectin   規(guī)格：      英文縮寫：   CP

小鼠細胞表面分子CD100   英文名稱：   Mouse cluster of differeiation 100   規(guī)格：      英文縮寫：   CD100

小鼠2(VD2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone specific alkaline phosphatase B (ALP-B) ELISA Kit 大鼠骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)試劑盒

Humanproteindisulfide-isomeraseA3,PDIA3ELISAKit 人蛋白二硫化物異構酶A3(PDIA3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgG試劑盒雞流行性乙型腦抗體IgG(JEIgG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞INSULIN蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseghcagons-likepepfide1,GLP-1ELISAKit小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IgG1重組小鼠 IgG1-Fc 蛋白 (102 Cys/Ser) Protein

CK17(Cytokeratin 17 0.5mgCK17(Cytokeratin 17) 細胞角蛋白17抗原

SERPINB4重組人 SerpinB4 蛋白 Protein

CDKN2D Protein Human 重組人 CDKN2D / p19ink4d 蛋白 (GST 標簽)

FGF1 Protein Mouse 重組小鼠 / 大鼠 aFGF / FGF1 蛋白

CK17(Cytokeratin 17 0.5mgCK17(Cytokeratin 17) 細胞角蛋白17抗原

CDKN2D Protein Human 重組人 CDKN2D / p19ink4d 蛋白 (GST 標簽)

IgG1重組小鼠 IgG1-Fc 蛋白 (102 Cys/Ser) Protein

FGF1 Protein Mouse 重組小鼠 / 大鼠 aFGF / FGF1 蛋白

SERPINB4重組人 SerpinB4 蛋白 Protein

大鼠腎小球系膜細胞人中期因子(MK)ELISA 試劑盒

People / endotoxin lipopolysaccharide (LPS) ELISA Kit 人脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)試劑盒

Humanmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 人黑色素細胞抗體(MCAb)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanHydrocoisone,HYD試劑盒人(HYD)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織肌酸激酶(CK)活性酶動力比色法定量試劑盒25次

Humanlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)試劑盒規(guī)格：96T/48T