細胞簡介：

大鼠眼動脈內(nèi)皮分離自眼動脈組織，眼動脈是眼眶及內(nèi)容物主要的血液供應(yīng)，是頸內(nèi)動脈主要分枝，也是交通顱內(nèi)外血管的重要通道。有研究結(jié)果認為，絕大多數(shù)眼動脈起源于ICA剛出海綿竇處，且多數(shù)起源于ICA床突上段內(nèi)上壁，少數(shù)起源于上壁，少數(shù)眼動脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動脈。眼動脈的走行分為顱內(nèi)段、管內(nèi)段及眶內(nèi)段，眼動脈在管內(nèi)段一般行走于視神經(jīng)上方，顱內(nèi)段和眶內(nèi)段再分為五段：1、短臂；2、A角；3、長臂；4、B角；5、遠側(cè)部。眼動脈進入眶內(nèi)后沿視神經(jīng)向下外側(cè)走行，終止于眶孔的上內(nèi)側(cè)角。眼動脈的分枝一般分為眼組、眶組及眶外組。眼組分為視網(wǎng)膜中央動脈睫前動脈及眼球的脈絡(luò)叢；眶組分為淚腺動脈和肌動脈；眶外組分為篩后動脈、篩前動脈、眶上動脈、瞼內(nèi)側(cè)動脈、鼻背動脈(終末枝)。眼動脈內(nèi)皮細胞是覆蓋在眼動脈內(nèi)面的單層細胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些血管疾病的發(fā)生。因此，眼動脈內(nèi)皮細胞已成為研究眼部血管疾病發(fā)病機制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專門上皮細胞，由一層扁平細胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細胞是沿著整個循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。眼動脈供應(yīng)整個眼球、眼球附屬器及部分附近組織的營養(yǎng)。眼動脈可發(fā)生痙攣、血栓、栓塞及出血等，均可嚴重影響視力。頸內(nèi)動脈眼動脈瘤簡稱眼動脈瘤，又稱床突旁動脈瘤或頸內(nèi)動脈腹側(cè)動脈瘤。眼動脈瘤是位于眼動脈和后交通動脈之間的動脈瘤，占全部顱內(nèi)動脈瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表現(xiàn)為SAH，1/3有視功能損傷，如視力減退、視野缺損和視神經(jīng)等。體外培養(yǎng)的眼動脈內(nèi)皮細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠眼動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠眼動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠眼動脈內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠兒茶酚抑素(CST)檢測試劑盒 ，英文名： CST ELISA Kit

Pigskin quality ketone / coicosterone (CO) ELISA Kit 豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)檢測試劑盒

魚特定基因序列(Fish)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforLZM(MouseLysozyme)ELISAKit小鼠

體液總膽汁酸酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitIGF-1雞胰島素樣生長因子1

HA重組甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

METTL1重組人 METTL1 蛋白 Protein

CD81 Protein Human 重組人 CD81 / TAPA-1 蛋白

APP Protein Human 重組人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c 0.5mgPAP2c (Phosphatidic acid phosphatase 2c) 0脂酸0酸酶2C(抗原)

CD81 Protein Human 重組人 CD81 / TAPA-1 蛋白

HA重組甲型流感 H6N8 (A/mallard/Ohio/217/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

APP Protein Human 重組人 APP / Protease nexin-II 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

METTL1重組人 METTL1 蛋白 Protein

小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ulasensitive thyroid stimulating hormone (U-TSH) ELISA Kit 大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒

HumanAspaateaminoansferase,ASTELISAKit 人天門冬氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenAi-ThrombinⅢ,AT-Ⅲ檢測試劑盒雞抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞BAD蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHistamine,HISELISAKit小鼠組胺(HIS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠眼動脈內(nèi)皮細胞小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血管舒緩(BK)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。