實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠終板軟骨分離自椎間盤終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長發(fā)育過程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構成椎間盤。椎體終板構成了椎間盤的上下邊界，位于椎體中心的松質骨和椎間盤之間。是由軟骨下骨和厚度相當?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體，同時具有平衡分散應力的作用。成熟的終板軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，終板軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠終板軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化并結合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白細胞介素13(IL-13)檢測試劑盒 ，英文名： IL-13 ELISA Kit

Phaseolus vulgaris agglinin (PHA) ELISA Kit 菜豆凝集素(PHA)檢測試劑盒

MouseToll-likereceptor9,TLR-9ELISAkit 小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanNeuroglobin,NGBELISAKit人腦紅蛋白

銅蛋白電泳染色試劑盒10次

sRANKL大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基

IL13重組人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 標簽) Protein

瘦素(LEP)重組蛋白 Recombinant Leptin (LEP)

SCGB3A1重組人 SCGB3A1 / HIN-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD97 Protein Human 重組人 CD97 蛋白

HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

瘦素(LEP)重組蛋白 Recombinant Leptin (LEP)

CD97 Protein Human 重組人 CD97 蛋白

IL13重組人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 (A/Wyoming/03/2003) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

SCGB3A1重組人 SCGB3A1 / HIN-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠仙臺病毒抗體(HVJ-Ab)檢測試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 2 (BMP-2) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)檢測試劑盒

Humannon-neuronalenolase,NNEELISAKit 人非神經(jīng)元性烯醇化酶(NNE)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenHeatShockProtein70,Hsp-70檢測試劑盒雞熱休克蛋白70(HSP-70)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞CDK3蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein90,Hsp-90ELISAKit小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠終板軟骨細胞小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠黑色素細胞抗體(MCAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠甲狀腺素(T4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T