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細(xì)胞簡介：

人鼻黏膜上皮分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在人體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同，鼻黏膜又分為前庭部、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是鄰近外鼻孔的部分，有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部，有發(fā)達(dá)的上皮纖毛，它們可向咽部擺動(dòng)，黏著有塵粒、細(xì)菌的黏液排向咽部，終將它們排出體外。此外，此部分有豐富的血管與腺體，對(duì)吸入的空氣有加溫和濕潤作用。嗅部黏膜范圍較小，主要位于鼻腔頂部。它含有一種專司嗅覺的嗅細(xì)胞及嗅腺，它們分泌能溶解到達(dá)嗅區(qū)的含氣味的微粒，刺激嗅細(xì)胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺，而且還由于嗅細(xì)胞具有不同的受體，可分別接受不同化學(xué)分子的刺激，因此可產(chǎn)生不同的嗅覺。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的人鼻黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人鼻黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人脂肪酶(Lipase)ELISA 試劑盒

People of lipoxin A4 (LXA4) ELISA Kit 人脂氧素A4(LXA4)檢測試劑盒

HumanNeuroglobin,NGBELISAKit 人腦紅蛋白(NGB)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humanHypotheticalproteinLOC677168檢測試劑盒人假定蛋白LOC677168檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性比色法定量檢測試劑盒25次

HumanLipoarabinomannan,LAMELISAKit人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

S100A4重組小鼠 S100A4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

肌原纖蛋白1(FBN1)重組蛋白 Recombinant Fibrillin 1 (FBN1)

STC2重組人 STC2 / Stanniocalcin 2 蛋白 Protein

CDH16 Protein Human 重組人 KSP-Cadherin / Cadherin-16 / CDH16 蛋白

NTRK1 Protein Canine 重組狗 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

肌原纖蛋白1(FBN1)重組蛋白 Recombinant Fibrillin 1 (FBN1)

CDH16 Protein Human 重組人 KSP-Cadherin / Cadherin-16 / CDH16 蛋白

S100A4重組小鼠 S100A4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

NTRK1 Protein Canine 重組狗 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

STC2重組人 STC2 / Stanniocalcin 2 蛋白 Protein

小鼠(Cyt-C)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human lymphocyte chemotactic factor (Lptn/LTN/XCL1) ELISA Kit 人淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)檢測試劑盒

HumanAcetylcholinesterase,AChEELISAKit 人乙酰酯酶(AChE)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenImmunoglobulinG,IgG檢測試劑盒雞免疫球蛋白G(IgG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞CYP2B1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人鼻黏膜上皮細(xì)胞小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠心肽(ANP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。