實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人甲狀腺癌組織源分離自癌組織；癌（cancer）是指起源于上皮組織的惡性腫瘤，是惡性腫瘤中常見的一類。相對應(yīng)的，起源于間葉組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱為肉瘤。有少數(shù)惡性腫瘤不按上述原則命名，如腎母細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤等。一般人們所說的“癌癥"習(xí)慣上泛指所有惡性腫瘤。癌癥具有細(xì)胞分化和增殖異常、生長失去控制、浸潤性和轉(zhuǎn)移性等生物學(xué)特征，其發(fā)生是一個多因子、多步驟的復(fù)雜過程，分為致癌、促癌、演進(jìn)三個過程，與吸煙、感染、職業(yè)暴露、環(huán)境污染、不合理膳食、遺傳因素密切相關(guān)。癌細(xì)胞，是一種變異的細(xì)胞，是產(chǎn)生癌癥的病源。癌細(xì)胞與正常細(xì)胞不同，有無限增殖、可轉(zhuǎn)化和易轉(zhuǎn)移三大特點(diǎn)，能夠無限增殖并破壞正常的細(xì)胞組織。癌細(xì)胞除了分裂失控外（能進(jìn)行多極分裂），還會局部侵入周圍正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部分。分惡性和良性兩種。

方法簡介：

公司實驗室分離的癌組織源采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人甲狀腺癌組織源經(jīng)檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBSa生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠組蛋白H3(H3)檢測試劑盒 ，英文名： H3 ELISA Kit

Nude mice of cyclooxygenase 2 (COX-2) ELISA Kit 裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)檢測試劑盒

Mouseinsulinaoaibodies,IAAELISAKit 小鼠胰島素自身抗體(IAA)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISAKit人巨噬細(xì)胞性蛋白2

土壤氮含量克爾道(Kjeldahl)法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitACA-IgA大鼠抗心0脂抗體IgA

HAVCR1重組食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

MTR-1A (Melatonin receptor-1A 0.5mgMTR-1A (Melatonin receptor-1A) 褪黑素受體(抗原)

PDE4B重組人 PDE4B / DPDE4 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CFL1 Protein Human 重組人 CFL1 / N-cofilin 蛋白

ENTPD5 Protein Mouse 重組小鼠 ENTPD5 蛋白

MTR-1A (Melatonin receptor-1A 0.5mgMTR-1A (Melatonin receptor-1A) 褪黑素受體(抗原)

CFL1 Protein Human 重組人 CFL1 / N-cofilin 蛋白

HAVCR1重組食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

ENTPD5 Protein Mouse 重組小鼠 ENTPD5 蛋白

PDE4B重組人 PDE4B / DPDE4 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠同型半胱酸(Hcy)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human dermatan sulfate (DS) ELISA Kit 人皮膚素(DS)檢測試劑盒

HumanCpGoligodeoxynucleotide,CpG-ODNELISAKit 人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickehyroxine,T4檢測試劑盒雞甲狀腺素(T4)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人甲狀腺癌組織源細(xì)胞小鼠鐵蛋白檢測試劑盒   小鼠鐵蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠鐵蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠鐵蛋白試劑盒、小鼠鐵蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠糖原0酸化酶同工酶檢測試劑盒   小鼠糖原0酸化酶同工酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠糖原0酸化酶同工酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠糖原0酸化酶同工酶試劑盒、小鼠糖原0酸化酶同工酶檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠糖化血紅蛋白檢測試劑盒   小鼠糖化血紅蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠糖化血紅蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠糖化血紅蛋白試劑盒、小鼠糖化血紅蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體檢測試劑盒   小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體試劑盒、小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。