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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人腦靜脈血管平滑肌分離自腦靜脈組織；與腦動(dòng)脈相比，腦靜脈管壁較薄。與身體其他部位的靜脈不同，腦靜脈管壁中沒(méi)有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴高位的勢(shì)能。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈；小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢，進(jìn)入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮，后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng)。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢，即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞，大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流。腦靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦靜脈血管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子11(FGF11)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： FGF11 ELISA Kit

Human XC chemokine receptor 1 (XCR1) ELISA Kit 人XC趨化因子受體1(XCR1)檢測(cè)試劑盒

RatCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforCr(MouseCrosslaps)ELISAKit小鼠骨膠原交聯(lián)

細(xì)胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒20次

RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD59重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein

KT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗原

CPLX2重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein

IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白

IgG2a Protein Mouse 重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白

KT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗原 0.5mgKT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗原

IL1R1 Protein Human 重組人 IL1R1 / CD121a 蛋白

CD59重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白 Protein

IgG2a Protein Mouse 重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白

CPLX2重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白 Protein

豚鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit

Human apoptosis protease activating factor 1 (ICAD) ELISA Kit 人凋亡蛋白酶激活因子1(ICAD)檢測(cè)試劑盒

Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBFP(Humanbasicfetoprotein,BFP)ELISAKit人堿性胎兒蛋白

細(xì)菌氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit兔子白介素8(IL-8/CXCL8)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞乳酸（LD）（血清、組織）檢測(cè)   Lactic acid (LD) (whole blood) detection

乳酸（LD）（全血）檢測(cè)   Lactate dehydrogenase (LDH) detection

乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)   ATP enzyme (sodium and potassium, calcium and  ATP enzyme) detection

ATP酶（、鈣ATP酶）檢測(cè)   Any one, sodium potassium calcium and  ATP enzyme detection

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。