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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人腎皮質上皮分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。

方法簡介：

公司實驗室分離的人腎皮質上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人腎皮質上皮經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠內臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)檢測試劑盒 ，英文名： Vaspin ELISA Kit

Monkey ierferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 猴γ干擾素(IFN-γ)檢測試劑盒

Ratlipoproteinα,Lp-αELISAKit 大鼠脂蛋白α(Lp-α)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGlyCAM-1(Humanglycosylation-dependecelladhesionmolecule-1)ELISAKit人糖基化依賴的細胞黏附分子

細胞非蛋白/游離巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

RatSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISAKit大鼠基質細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)檢測試劑盒規格：96T/48T

CD48重組大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受體(抗原 0.5mgER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受體(抗原)

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IgG1 Protein Human 重組人 IgG1 Fc 蛋白

CD99 Protein Mouse 重組小鼠 CD99 / PILR1 蛋白 (Fc 標簽)

ER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受體(抗原 0.5mgER-Alpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta 雌激素受體(抗原)

IgG1 Protein Human 重組人 IgG1 Fc 蛋白

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CD4重組人 CD4 / LEU3 蛋白 (aa 1-208, His 標簽) Protein

豚鼠胰島素樣生長因子2(IGF2)檢測試劑盒 ，英文名： IGF2 ELISA Kit

Human Chlamydia pneumoniae aibody (Cpn-Ab) ELISA Kit 人肺衣原體抗體(Cpn-Ab)檢測試劑盒

rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit 兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBcl3(humanB-cellleukemia/lymphoma3)ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子3

纖維蛋白溶酶(PLASMIN)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitCoisolELISAKit兔子(Coisol)檢測試劑盒規格：96T/48T

人腎皮質上皮細胞雙向調節蛋白   英文名稱：   Amphiregulin   規格：      英文縮寫：   AR

固   英文名稱：   Aldosterone   規格：      英文縮寫：   Aldosterone

白細胞活化黏附因子   英文名稱：   Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule   規格：      英文縮寫：   ALCAM

膜聯蛋白5   英文名稱：   Annexin 5   規格：      英文縮寫：   ANXA-5