細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點(diǎn)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖采用采集外周血、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代；不建議多次傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠淋巴細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原1α(LFA1α)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LFA1α ELISA Kit

Monkey ierleukin 2 receptor (IL-2R) ELISA Kit白介素2受體(IL-2R)檢測(cè)試劑盒

RatLDL-ICELISAKit 大鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGAP(HumanGTPaseactivatingprotein)ELISAKit人GTP酶活化蛋白

細(xì)胞骨架(肌動(dòng)蛋白單體;G-ACTIN)紅色熒光染色試劑盒10次

RatproteinkinaseB,PKBELISAKit大鼠蛋白激酶B(PKB)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

GB重組巨細(xì)胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1 0.5mgTNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1) 壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗原

AGO2重組人 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白 Protein

IGFL2 Protein Human 重組人 IGFL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TGFBI Protein Human 重組人 TGFBI / BIGH3 蛋白

TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1 0.5mgTNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1) 壞死因子α誘導(dǎo)蛋白1抗原

IGFL2 Protein Human 重組人 IGFL2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

GB重組巨細(xì)胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

TGFBI Protein Human 重組人 TGFBI / BIGH3 蛋白

AGO2重組人 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白 Protein

豚鼠乙型肝病毒表面抗原(HBsAg)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： HBsAg ELISA Kit

Human protein tyrosine kinase (PTK/CD115) ELISA Kit 人蛋白酪激酶(PTK/CD115)檢測(cè)試劑盒

Monkeyai-livercellmembraneaibody,LMAELISAKit 猴抗肝細(xì)胞膜抗體(LMA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBMP-4(HumanBonemorphogeneticprotein4)ELISAKi人骨成型蛋白4

細(xì)菌鎂離子濃度酶反應(yīng)光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

rabbitmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人外周血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞水土中亞鹽含量測(cè)定試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣

血糖含量試劑盒   酶標(biāo)法    50管/48樣

動(dòng)植物組織葡萄糖含量試劑盒   酶標(biāo)法    50管/48樣

動(dòng)植物組織葡萄糖含量試劑盒   可見(jiàn)分光光度法    50管/48樣

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。