① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人牙周膜干細胞

英文名稱：Human Periodontal Ligament Stem Cells

組織來源：牙周膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人牙周膜干分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi)，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi)；牙周膜內(nèi)有神經(jīng)、血管、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時期的中胚層組織，具有很強的自我復制和多向分化潛能，具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞及肌細胞等多種終末細胞定向分化的能力，運用 MSCs來修復軟骨損傷具有很好的應用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細胞。牙周膜干細胞參與了牙周組織的病變、修復及再生過程。現(xiàn)在，利用牙周膜干細胞建立體外模型，已經(jīng)成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。

公司實驗室分離的人牙周膜干采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人牙周膜干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結(jié)合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

小鼠神經(jīng)營養(yǎng)素4(mouse -4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠(mouse NO)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠骨保護素(mouse OPG)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠骨橋素(mouse OPN)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat maix metalloproteinase 2/ gelatinase A (MMP-2/Gelatinase A) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒

HumanNeuronalChemorepelleSlit2ELISAKit 人神經(jīng)生長導向因子Slit2試劑盒 96T/48T 進口分裝

DuckIerleukin2,IL-2試劑盒鴨白介素2(IL-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

棗椰樹(datepalm)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

MouseDehydroepiandrosterone,DHEAELISAKit小鼠脫氫表雄同(DHEA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 Protein

顆粒酶H(GZMH)重組蛋白 Recombinant Granzyme H (GZMH)

VTI1A重組人 VTI1A 蛋白 Protein

CLEC4D Protein Human 重組人 CLEC4D / CLECSF8 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

顆粒酶H(GZMH)重組蛋白 Recombinant Granzyme H (GZMH)

CLEC4D Protein Human 重組人 CLEC4D / CLECSF8 蛋白

CA10重組人 Carbonic Anhydrase X / CA10 蛋白 Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

VTI1A重組人 VTI1A 蛋白 Protein

人牙周膜干細胞大鼠熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)試劑盒 ，英文名： HSF1 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)試劑盒

RatAquaporin3,AQP-3ELISAKit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGuineapigierleukin4,IL-4ELISAKit豚鼠白介素4

細胞長鏈脂酰脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量試劑盒20次

Rattyrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains2,Tie-2ELISAKit大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶2(Tie-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用