實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔肺泡巨噬分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細(xì)支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞較易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長(zhǎng)期生存。巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞，在脊椎動(dòng)物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫)。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍，有重要防御功能。肺泡是重要的巨噬細(xì)胞儲(chǔ)存器官，為結(jié)核病的研究提供了重要的材料。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺泡巨噬采用機(jī)械研磨結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺泡巨噬經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 巨噬細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 （12mM）

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子白三烯B4(LTB4)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)檢測(cè)試劑盒

Humanai-neuroblastoma-aibody,NB-AbELISAKit 人抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤抗體(NB-Ab)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanEsogeeceptor,ER檢測(cè)試劑盒人雌激素受體(ER)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織SPRK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

humanorosomucoid2,ORM2ELISAKit人類粘蛋白2(ORM2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

GB重組巨細(xì)胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 Protein

TM(Thrombomodulin 0.5mgTM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽

PARP1重組人 PARP-1 / PARP 蛋白 Protein

IL3 Protein Human 重組人 IL3 / IL-3 蛋白

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

TM(Thrombomodulin 0.5mgTM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽

IL3 Protein Human 重組人 IL3 / IL-3 蛋白

GB重組巨細(xì)胞病毒 HCMV Glycoprotein B / gB 蛋白 Protein

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

PARP1重組人 PARP-1 / PARP 蛋白 Protein

豚鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GAPDH ELISA Kit

Human paraoxonase (PON) ELISA Kit 人酶(PON)檢測(cè)試劑盒

RabbitProgesterone,PROGELISAKit 兔子孕激素/孕酮(PROG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBF(HumanfactorB)ELISAKit人B因子

細(xì)菌糖酵解溴百里酚藍(lán)(BTB)檢測(cè)試劑盒20次

rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit兔子細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔肺泡巨噬細(xì)胞人轉(zhuǎn)錄激活因子4(ATF4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ATF4 (Activating anscription Factor 4) ELISA Kit

人轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit

人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit

人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit