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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：兔脊髓神經(jīng)元細胞

英文名稱：Rabbit Spinal Cord Neuron Cells

組織來源：脊髓組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

兔脊髓神經(jīng)元分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結構，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細胞構成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應的31節(jié)，31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結構和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細胞，神經(jīng)元含量少，分離純化難度大，且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞，不能分裂增殖，培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小，透亮，無突起。培養(yǎng)2-3d，可見胞體增大，突起增多延長；培養(yǎng)6-7d，細胞體大飽滿，突起明顯增加延長并交織成網(wǎng)，光暈明顯，立體感強。培養(yǎng)20d后，死亡細胞明顯增加，細胞出現(xiàn)內(nèi)空泡，突起粗細不均，甚至脫壁，發(fā)生細胞崩解。

公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

小鼠IP-10(mouse IP-10)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠8異前列腺素(mouse 8-iso-PG)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠白三烯B4(mouse LTB4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠瘦素(mouse Leptin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠骨堿性0酸酶(BALP)試劑盒

Human growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽(GHRP)試劑盒

Humangasicinhibitorypolypeptide,GIPELISAKit 人胃抑素(GIP)試劑盒 進口分裝

Humanai-ribonucleoproteinAibody,RNP-Ab試劑盒人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)試劑盒

植物細胞原生質(zhì)體化學轉染試劑盒10次

HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒

NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein

NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)

SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標簽) Protein

FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白

CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標簽)

NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)

FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白

NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein

CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標簽)

SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標簽) Protein

兔脊髓神經(jīng)元細胞大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)試劑盒 ，英文名： GMCSF ELISA Kit

Mouse Helicobacter pylori IgG (Hp-IgG) ELISA Kit 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)試劑盒

RatPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforGAG(Humanglycosaminoglycan)ELISAKit人糖胺聚糖試劑盒

細胞果糖-1,6-二0酸縮酶(ALD)定量試劑盒20次

RatProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit大鼠前列腺素E2(PGE2)試劑盒

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用