實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔甲狀腺濾泡上皮分離自甲狀腺組織；甲狀腺是脊椎動物非常重要的腺體，屬于內分泌器官。在哺乳動物身體中，它位于頸部甲狀軟骨下方，氣管兩旁。甲狀腺表面有結締組織被膜，表面結締組織深入到腺實質，將實質分為許多不明顯的小葉，小葉內有很多甲狀腺濾泡和濾泡旁細胞。甲狀腺控制使用能量的速度、制造蛋白質、調節(jié)機體對其他賀爾蒙的敏感性。甲狀腺依靠制造甲狀腺素來調整這些反應，有T3和T4。這兩者調控代謝、生長速率還有調解其他的身體系統(tǒng)。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲狀腺也生產降鈣素，調節(jié)體內鈣的平衡。其中，甲狀腺濾泡上皮細胞（也稱為濾泡細胞或主要細胞）是在甲狀腺細胞是負責生產和分泌甲狀腺激素，甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原（T3）。

方法簡介：

實驗室分離的兔甲狀腺濾泡上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的兔甲狀腺濾泡上皮經TG(甲狀腺球蛋白)免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔甲狀腺濾泡上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠交聯(lián)物(PY)檢測試劑盒 ，英文名： PY ELISA Kit

Mouse beta hexosaminidase A (beta -hexosaminidase A) ELISA Kit 小鼠β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidase A)檢測試劑盒

ELISA 小鼠堿性成纖維生長因子(mouse b-FGF/FGF-2)  進口分裝

CLIAKitforKAF/ARELISAKit大鼠角化細胞內分泌因子/雙調蛋白

通用型蛋白巰基/結合巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitMBP大鼠主要堿性蛋白

ACVR1重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

FAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor 0.5mgFAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor) 一種新型的胰島細胞因子(抗原)

GAD1重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 Protein

GNGT1 Protein Human 重組人 GNGT1 / GNG1 蛋白

CNDP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 蛋白

FAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor 0.5mgFAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor) 一種新型的胰島細胞因子(抗原)

GNGT1 Protein Human 重組人 GNGT1 / GNG1 蛋白

ACVR1重組大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CNDP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 蛋白

GAD1重組人 GAD67 / GAD1 蛋白 Protein

小鼠白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat neuroophin 4 (-4) ELISA Kit 大鼠神經營養(yǎng)因子4(-4)檢測試劑盒

HumanOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit 人骨保護素配體(OPGL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancaspaseactivateddeoxyribonuclease,CAD檢測試劑盒人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉基因油菜(canola)GT73品系試劑盒20次

humansimilaoRIKENcDNA4931408D14geneELISAKit人類似RIKENcDNA4931408D14基因檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔甲狀腺濾泡上皮細胞兔子促甲狀腺素(TSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子雌二醇(E2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子表皮生長因子(EGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T