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細(xì)胞簡介：

兔三叉神經(jīng)元分離自三叉神經(jīng)組織；三叉神經(jīng)為粗大的混合性腦神經(jīng)，含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核，纖維組成三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內(nèi)側(cè)，后進(jìn)入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中，經(jīng)卵圓孔出顱，隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)（半月節(jié)）內(nèi)，該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。三叉神經(jīng)節(jié)由假單極神經(jīng)元組成，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉神經(jīng)感覺根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦，止于三叉神經(jīng)諸感覺核，其中傳導(dǎo)痛溫覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)脊束核；傳導(dǎo)觸覺的纖維主要終止于三叉神經(jīng)腦橋核。三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉神經(jīng)三大分支，即第1支眼神經(jīng)、第2支上頜神經(jīng)、第3支為下頜神經(jīng)。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚、眼及眶內(nèi)、口腔、鼻腔、鼻旁竇的粘膜、牙、腦膜等，傳導(dǎo)痛、溫、觸等多種感覺。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔三叉神經(jīng)元采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔三叉神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔三叉神經(jīng)元體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠雌二醇受體(ER)檢測試劑盒 ，英文名： ER ELISA Kit

Mouse 5 nucleotidase (5-) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶(5-)檢測試劑盒

ELISA 小鼠CXCL1/KC(mouse KC)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLF/LTF(MouseLactoferrin)ELISAKIT小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白

通用型HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性檢測試劑盒20次

ELISAKitMIF巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (28 Ser/Trp, His 標(biāo)簽) Protein

rHBcAg 重組乙肝病毒核心抗原 100ugrHBcAg 重組乙肝病毒核心抗原

ULBP1重組人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

IFNA8 Protein Human 重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

GZMB Protein Human 重組人 Granzyme B / GZMB 蛋白

rHBcAg 重組乙肝病毒核心抗原 100ugrHBcAg 重組乙肝病毒核心抗原

IFNA8 Protein Human 重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (28 Ser/Trp, His 標(biāo)簽) Protein

GZMB Protein Human 重組人 Granzyme B / GZMB 蛋白

ULBP1重組人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human gasin releasing peptide (GRP) ELISA Kit 人胃泌素釋放多肽(GRP)檢測試劑盒

Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 人能a1A受體(ADRA1A)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMR檢測試劑盒人協(xié)同刺激分子受體(CMR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CLK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinkinaseA,PKAELISAKit人蛋白激酶A(PKA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔三叉神經(jīng)元細(xì)胞同型半胱酸（Hcy）測定試劑盒（酶循環(huán)法）

β-（D3-H）測定試劑盒（酶比色法）

D-二聚體（D-Dimer）測定試劑盒（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法）

轉(zhuǎn)鐵蛋白（F）測定試劑盒（免疫比濁法）

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。