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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

兔腎小球上皮分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球上皮細(xì)胞是由間充質(zhì)細(xì)胞分化發(fā)育、襯貼于腎小球血管腔的單層扁平上皮細(xì)胞，是腎小球的固有細(xì)胞之一，也是構(gòu)成腎小球?yàn)V過膜的重要組成部分。腎小球上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能是腎單位濾過及腎小球微環(huán)境穩(wěn)定的重要保障。腎小球?yàn)V過膜的外層為上皮細(xì)胞層，厚約40nm，腎小球上皮細(xì)胞是腎小囊的臟層上皮細(xì)胞，貼附于腎小球血管外側(cè)基底膜上。上皮細(xì)胞又稱足細(xì)胞，足細(xì)胞的不規(guī)則突起為足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾過膜過濾入腎小球囊。腎小球上皮細(xì)胞可通過合成和分泌腎上腺髓質(zhì)肽抑制系膜細(xì)胞增殖，腎上腺髓質(zhì)肽作為一種重要的旁分泌因子，可保持腎小球微環(huán)境穩(wěn)定，并參與腎小球的炎癥過程。體外培養(yǎng)的腎小球上皮細(xì)胞對(duì)各型腎小球腎炎具有重要的研究價(jià)值。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎小球上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎小球上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腎小球上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素18(IL-18)檢測試劑盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit

Mouse alanine aminoansferase (ALT) ELISA Kit 小鼠氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測試劑盒

ELISA 小鼠白介素-23(mouse IL-23)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-2sRBetaELISAKit大鼠白介素2可溶性受體β鏈

通用型雞新城疫(NewcastleDiseaseVirus;NDV)試劑盒20次

ELISAKitFA大鼠

彩色預(yù)染蛋白Mark(10帶) 200ul

Trop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原 0.5mgTrop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原

INSR重組人 Insulin Receptor / INSR / CD220 蛋白 (long isoform, His 標(biāo)簽) Protein

ICAM5 Protein Human 重組人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽)

EGFR Protein Human 重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Trop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原 0.5mgTrop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原

ICAM5 Protein Human 重組人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (ECD, His 標(biāo)簽)

彩色預(yù)染蛋白Mark(10帶) 200ul

EGFR Protein Human 重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

INSR重組人 Insulin Receptor / INSR / CD220 蛋白 (long isoform, His 標(biāo)簽) Protein

小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human pepsin (Pepsin) ELISA Kit 人(Pepsin)檢測試劑盒

Human16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit 人16α羥基雌酮1(16-αOHE-1)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancomplexedprostatespecificaigen,cPSA檢測試劑盒人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CDK4/CYCLIND激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinase3Aibody,PR3AbELISAKit人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔腎小球上皮細(xì)胞兔白介素-1a(rabbit IL-1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-1β(rabbit IL-1β)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-1RA(rabbit IL-1ra)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-2(rabbit IL-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝