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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠腸微血管內皮分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至的消化管。腸是消化管中長的一段，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的，大腸主要濃縮食物殘渣，形成糞便，再通過直腸經排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養分，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內大的微生態系統。微血管是極細微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動、靜脈之間，互相連接成網狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進行物質交換。其管壁主要由一層內皮細胞構成，在內皮外面有一薄層結締組織。另外還常可見到一種扁而有突起的細胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腸微血管內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腸微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

豬瘦素試劑盒   豬瘦素試劑盒   規格型號：96T/48T   豬瘦素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：豬瘦素試劑盒、豬瘦素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

豬食欲素受體試劑盒   豬食欲素受體試劑盒   規格型號：96T/48T   豬食欲素受體試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產品別名：豬食欲素受體試劑盒、豬食欲素受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

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豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒

Human somelysin-3 (ST2) ELISA Kit 人基質裂解素(ST2)試劑盒

GuineapigovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforANG-2(HumanAngiopoietin2)ELISAKit人血管生成素2

血液酶1(PON1)芳香酯酶活性比色法定量試劑盒

PorcineE-SelectinELISAKit豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)試劑盒

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IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 0.5mgIGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term 胰島素樣生長因子結合蛋白-3抗原

MAP2K2重組人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 標簽) Protein

B3GNT6 Protein Human 重組人 B3GNT6 蛋白 (aa 44-384, His 標簽)

KLRB1A Protein Mouse 重組小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 蛋白 (His 標簽)

IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 0.5mgIGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term 胰島素樣生長因子結合蛋白-3抗原

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小鼠腸微血管內皮細胞大鼠核轉錄因子κB(NFκB)試劑盒 ，英文名： NFκB ELISA Kit

Rabbit noradrenaline (NA) ELISA Kit 兔去甲(NA)試劑盒

漢坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸試劑盒(-PCR法) 48T

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體液肌酐(CREATININE)酶連續反應比色法定量試劑盒20次

ELISAKit12-HETE人12羥二十烷四烯酸