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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠肝非實(shí)質(zhì)分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞是指除了肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞之外的細(xì)胞，主要包含了肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、肝枯否細(xì)胞。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝非實(shí)質(zhì)采用取肝臟灌流、膠原酶消化、密度梯度離心法制備而來(lái)制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝非實(shí)質(zhì)經(jīng)過(guò)檢測(cè)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠中期因子(MK)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)檢測(cè)試劑盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

TMEM25重組人 TMEM25 蛋白 Protein

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

EFNB2重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PIGR Protein Human 重組人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 標(biāo)簽)

Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白 0.5mgSox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TSPAN1重組人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 標(biāo)簽) Protein

PLAU Protein Human 重組人 Urokinase / PLAU 蛋白

EFNB1重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat somal cell derived factor 1 beta (SDF-1 beta /CXCL12) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)檢測(cè)試劑盒

Humanai-filaggrinaibody,AFAELISAKit 人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3檢測(cè)試劑盒人1,25二羥基3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞線粒體DNA萃取試劑盒10/20次

MouseB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mouse GM-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mouse M-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠(mouse Cytochrome C)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。