細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠肝外膽管上皮分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見(jiàn)的膽管病變?nèi)缒懙篱]鎖、先天性膽總管囊腫、原發(fā)性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細(xì)胞為病變的靶位，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變膽管上皮細(xì)胞的病理生理學(xué)特征對(duì)研究膽管病變的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療具有重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝外膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化，接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝外膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪酸激酶2(Tie-2)ELISAKit   ELISA. 

豬血管生成素1(ANG-1)ELISAKit   ELISA. 

豬乙酰受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA. 

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISAKit   ELISA.

豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA 試劑盒

Human maix metalloproteinase 13 (MMP-13) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒

Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAKit 兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforai-DNaseB(Humanai-deoxyribonucleaseB)ELISAKit人抗DNA酶B抗體

血液α-L-巖藻糖苷酶(AFU)比色法定量試劑盒20次

PorcineHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit豬熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒

PILRB重組小鼠 PILRB1 蛋白  Protein

半乳糖凝集素9C(GAL9C)重組蛋白 Recombinant Galectin 9C (GAL9C)

MID1IP1重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BID Protein Human 重組人 BID 蛋白

DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

半乳糖凝集素9C(GAL9C)重組蛋白 Recombinant Galectin 9C (GAL9C)

BID Protein Human 重組人 BID 蛋白

PILRB重組小鼠 PILRB1 蛋白  Protein

DDR2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白

MID1IP1重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)試劑盒 ，英文名： Casp-9 ELISA Kit

Rabbit major histocompatibility complex class I (MHC I and /RLA I) ELISA Kit 兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)(MHCⅠ/RLAⅠ)試劑盒

東方體核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMMP-4(Humanmaixmetalloproteinase4)ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶4

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKitVA犬A

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。