細胞簡介：

小鼠骨髓樹突狀分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的；DC細胞，全稱樹突狀細胞(DC)，是近年來倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細胞(APC)，能攝取、加工及呈遞抗原，啟動T細胞介導的免疫反應(yīng)。由美國學者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)，從脾臟中分離出一類與粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞形態(tài)和功都不同的白細胞，因其細胞膜向外伸出，形成與神經(jīng)細胞軸突相似的膜性樹狀突起，故而命名為樹突狀細胞。未成熟DC具有較強的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細胞，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠骨髓DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀(DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼半懸浮

細胞形態(tài) 樹突狀

傳代特性 屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠中性粒細胞激活蛋白3(NAP3)檢測試劑盒 ，英文名： NAP3 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 86 (B7-2/sCD86) ELISA Kit 小鼠可溶性白細胞分化抗原86(B7-2/sCD86)檢測試劑盒

MouseFibronectin,FNELISAKit 小鼠纖連蛋白(FN)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanhypotheticalproteinLOC433328ELISAKit人假定蛋白LOC433328

B12高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCTGF大鼠結(jié)締組織生長因子

CD84重組小鼠 CD84 蛋白 Protein

UL16結(jié)合蛋白2(ULBP2)重組蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)

EPHA3重組人 EphA3 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 標簽)

鈣結(jié)合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標簽) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

小鼠Ⅸ(FⅨ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor VIII related aigen (VIII -Ag) ELISA Kit 人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)檢測試劑盒

Humanenkephalin,ENKELISAKit 人腦啡肽(ENK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCS檢測試劑盒人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒20次

MouseAquaporin1,AQP-1ELISAKit小鼠水通道蛋白1(AQP-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠骨髓樹突狀細胞(DC細胞)小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。