實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠骨分離自骨組織；骨組織的細胞成分包括骨原細胞、成骨細胞、骨細胞和破骨細胞。只有骨細胞存在于骨組織內(nèi)，其他三種細胞均位于骨組織的邊緣。骨細胞（Osteocyte）是人體骨骼中主要的細胞成分。在成年人骨骼中，骨細胞占細胞總數(shù)量的90%～95%，大約是成骨細胞數(shù)量的20倍。骨細胞生長在骨骼內(nèi)部的骨基質(zhì)中。骨細胞的細胞體呈梭形或類圓形，位于基質(zhì)構(gòu)成的骨陷窩內(nèi)。與神經(jīng)細胞類似，每個骨細胞具有大量向外延伸的突觸，而這些突觸均位于由骨基質(zhì)構(gòu)成的骨小管結(jié)構(gòu)中。通過這些突觸，骨細胞能夠與骨表面的細胞、周圍其它的骨細胞進行“交流"。普遍認為，骨細胞起源于成骨細胞。在骨形成的終末階段，成骨細胞將可能有3種不同的歸宿：分化成為骨細胞、轉(zhuǎn)移至骨表面成為暫不活動的成骨細胞、進入程序死亡過程（凋亡）。骨細胞為扁橢圓形多突起的細胞，核亦扁圓、染色深。胞質(zhì)弱嗜堿性。電鏡下，胞質(zhì)內(nèi)有少量溶酶體、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復合體亦不發(fā)達。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接。在骨基質(zhì)中，骨細胞胞體所占據(jù)的橢圓形小腔，稱為骨陷窩，其突起所在的空間稱骨小管。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連。骨陷窩和骨小管內(nèi)均含有組織液，骨細胞從中獲得養(yǎng)分。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠骨采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠骨經(jīng)骨鈣素免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因核酸試劑盒   48T

轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸試劑盒   48T

轉(zhuǎn)基因植物TE基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒

Human cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 人環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒

RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAP12ELISAKit大鼠apelin12

血清樣品液相法去內(nèi)毒素試劑盒20次

PorcineIerleukin13,IL-13ELISAKit豬白介素13(IL-13)試劑盒

CD47重組大鼠 CD47 蛋白  Protein

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(抗原)

STK16重組人 STK16 / PKL12 / MPSK 蛋白 (His & NusA 標簽) Protein

BPI Protein Human 重組人 BPI 蛋白 (His 標簽)

PLA2G1B Protein Mouse 重組小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 標簽)

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(抗原)

BPI Protein Human 重組人 BPI 蛋白 (His 標簽)

CD47重組大鼠 CD47 蛋白  Protein

PLA2G1B Protein Mouse 重組小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 標簽)

STK16重組人 STK16 / PKL12 / MPSK 蛋白 (His & NusA 標簽) Protein

小鼠骨細胞大鼠骨鈣素(OT)試劑盒 ，英文名： OT ELISA Kit

Rabbit ierleukin 1 (IL-1) ELISA Kit 兔子白介素1(IL-1)試劑盒

肺鏈球菌(SP)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMLCK(Humanmyosinlightchainkinase)ELISAKit人肌球蛋白輕鏈激酶

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)明膠法比色定量試劑盒20次

ELISAKitT犬睪同