實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

小鼠外周血白分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。白細(xì)胞（Leukocyte），舊稱白血球，血液中的一類細(xì)胞。根據(jù)白細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特殊顆粒，可將其分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞。前者常簡稱為粒細(xì)胞，根據(jù)其特殊顆粒的染色特性，又分為中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，白細(xì)胞也通常被稱為免疫細(xì)胞。在顯微鏡下可以看到，血細(xì)胞中體積比較大、數(shù)量比較少，具有細(xì)胞核；其主要作用是吞噬細(xì)菌、防御疾病。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠外周血白采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠外周血白經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

血管內(nèi)皮生長因子 D(VEGF-D)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

血管內(nèi)皮生長因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

血管內(nèi)皮生長因子受體 1(VEGF-R1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

血管內(nèi)皮生長因子受體 2(VEGF-R2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠幽門螺桿菌抗體IgG(HP-IgG)試劑盒 96T/48T

Human granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 人顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9ELISAKit 人糖鏈抗原19-9(CA19-9)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-K-PG(Mouse6-keto-prostaglandin)ELISAKit小鼠6同前列腺素

引物設(shè)計合成和酶切位點分析1個基因

Mousemelanocyteaibody,MCAbELISAKit小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CTHRC1重組人 CTHRC1 蛋白 Protein

CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白

HSPB1 Protein Human 重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白

HA重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

HSPB1 Protein Human 重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白

CTHRC1重組人 CTHRC1 蛋白 Protein

小鼠外周血白細(xì)胞大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS)試劑盒 ，英文名： FAS ELISA Kit

Porcine myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit 豬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒

玉米特定基因序列(IVR)核酸試劑盒 48T

CLIAKitforLTA(Humanlipoteichoicacids)ELISAKit人脂0壁酸

鐵成分比色法定量試劑盒20次

ELISAKitIgA雞免疫球蛋白A