細(xì)胞簡(jiǎn)介：

輸卵管位于人體的盆腔內(nèi)，一般的人有兩條，左、右輸卵管各位于一側(cè)。它們由底外側(cè)角部向外，平行伸展，先達(dá)卵巢的端，再沿卵巢系膜緣上行至卵巢的輸卵管端，且呈弓形而覆蓋于卵巢上，然后向下、向內(nèi)行，終止于卵巢的游離緣及其內(nèi)側(cè)面上部。

輸卵管是卵子運(yùn)輸、儲(chǔ)存、獲能，以及卵母細(xì)胞采取、運(yùn)送、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的重要場(chǎng)所。輸卵管與其他空腔器官相似，其管壁由內(nèi)向外為粘膜層、肌層和漿膜層所構(gòu)成。其中，肌層的結(jié)構(gòu)和厚度因不同節(jié)段而有差異，峽部肌層厚，管腔亦小。輸卵管肌層與肌層相連，內(nèi)層的縱行肌至峽部消失。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于手術(shù)切除的正常輸卵管組織。

2)細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

纈含量測(cè)試盒

大鼠可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)elisa檢測(cè)試劑盒

植物線粒體膜蛋白提取試劑盒100T

人谷受體(NMDAR)elisa分析檢測(cè)試劑盒

PGL3 BASIC＋目的基因

硫酸酯酶修飾因子1抗體  Anti-SUMF1

磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白1抗體  Anti-RKIP/PBP

核苷酸轉(zhuǎn)氫酶抗體  Anti-NNT

胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體（閉鎖小帶蛋白1）  Anti-ZO-1

貓干擾素ω抗體 cat INF ω

末端多聚腺苷酸2蛋白抗體 OGFOD2

FBN3蛋白抗體 FBN3

FITC標(biāo)記人CD62E/CD62P單克隆抗體 human CD62E/CD62P/FITC

嗅覺受體AI3重組兔單克隆抗體 ORAI3

血小板源性生長因子C抗體 PDGFC

蛋白磷酸酶畝mu抗體 PTP mu

第十七號(hào)染色體開放閱讀框87抗體 C17orf87

髓易位基因相關(guān)蛋白1抗體 MTGR1

調(diào)節(jié)分化蛋白ROD1抗體 ROD1/PTBP3

Pygopus 2蛋白抗體 Pygopus 2

RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體 RRAGA + RRAGB

21號(hào)染色體開放閱讀框62抗體 C21ORF62

5號(hào)染色體開放閱讀框24抗體 C5orf24

肌微管素相關(guān)蛋白1抗體 MTMR1

甲基轉(zhuǎn)移酶NSUN5抗體 NSUN5

組織糖原磷酸化酶激酶（GLYCOGEN PHOSPHORYLASE KINASE）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒

三碘甲狀腺原(T3)elisa生化檢測(cè)試劑盒

Sea Lion Triiodothyronine(T3)ELISA kit

人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)elisa生化檢測(cè)試劑盒

人輸卵管平滑肌細(xì)胞CCK-8ELISAKit