產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：F-actin Staining Kit (Green Fluorescence)

產(chǎn)品中文名稱：F-actin染色試劑盒（綠色熒光）

規(guī)格：50 T/300 T/1000 T

貨號(hào)：EY-01X8560
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，特別適用于甲醛固定與透化處理的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的F-actins標(biāo)記，鑒定以及定量需求。

•  的鬼筆環(huán)肽染料 (綠色熒光) (Ex/Em = 490/515 nm)，特異性地結(jié)合F-actins，且兼具比其它熒光素-鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物更強(qiáng)的光穩(wěn)定性。

保存建議:請(qǐng)參閱說(shuō)明書中各個(gè)組分的存儲(chǔ)條件。自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定6個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

鬼筆環(huán)肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來(lái)的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類毒素，是一種強(qiáng)烈毒素。它是一種特異性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白的雙環(huán)肽，因此，使用熒光染料偶聯(lián)的鬼筆環(huán)肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，半和之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。當(dāng)pH升高時(shí)，硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽喪失對(duì)肌動(dòng)蛋白的親和力。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯(lián)素受體-2(抗原)

FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

CXADR重組小鼠 CXADR 蛋白 Protein

IL13RA1 Protein Rat 重組大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 人水通道蛋白4(AQP-4)檢測(cè)試劑盒

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanApolipoproteinC3,ApoC3檢測(cè)試劑盒人載脂蛋白C3(ApoC3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(過(guò)氧亞硝基陰離子)20次

Humaoll-likereceptor9,TLR-9ELISAKit人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠 IgG(mouse IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) ADI

小鼠類胰島素樣生長(zhǎng)因子 -1 (mouse IGF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D

小鼠 IGF-II (Mouse IGF-II) ELISA Kit   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D

小鼠白介素 -1 a (mouse IL-1 a )   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender

大鼠細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： SOCS1 ELISA Kit

Mouse glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)檢測(cè)試劑盒

MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HSV-IIgM單皰疹Ⅰ型病毒IgM(捕獲法二步法)

細(xì)胞IRAK4激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-4大鼠白介素4

F-actin染色試劑盒（綠色熒光）CXADR重組小鼠 CXADR 蛋白 Protein

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯(lián)素受體-2(抗原)

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

FCGR2B Protein Human 重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

IL13RA1 Protein Rat 重組大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。