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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胃黏膜上皮分離自胃黏膜組織；胃黏膜柔軟，活體呈橘紅色。胃空虛時(shí)形成許多皺襞，充盈時(shí)變平坦。幽門(mén)處的黏膜形成環(huán)形皺襞，突向腔內(nèi)稱(chēng)幽門(mén)瓣。胃黏膜可分為三層，即上皮層（單層柱狀上皮）、固有層（由結(jié)締組織構(gòu)成、含有大量的胃腺）和黏膜肌層（為薄層平滑肌、排列成內(nèi)環(huán)外縱）。胃黏膜上皮細(xì)胞源自胃黏膜的上皮層，細(xì)胞為單層柱狀上皮，排列整齊，能分泌黏液覆蓋于胃黏膜的表面，防止胃酸和對(duì)胃黏膜的損害。體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞為研究細(xì)胞功能及致病因子、藥物、激素對(duì)細(xì)胞的損傷、保護(hù)和功能調(diào)控提供了簡(jiǎn)單而的模型。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人胃黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子內(nèi)皮抑素試劑盒   兔子內(nèi)皮抑素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子內(nèi)皮抑素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子內(nèi)皮抑素試劑盒、兔子內(nèi)皮抑素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子甲狀腺素試劑盒   兔子甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子甲狀腺素試劑盒、兔子甲狀腺素試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子Ⅱ試劑盒   兔子Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子Ⅱ試劑盒、兔子Ⅱ 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子受體試劑盒   兔子受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子受體試劑盒、兔子受體試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠白介素7(IL-7)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human melatonin (MT) ELISA Kit 人褪黑素(MT)試劑盒

Humanurokinase,UKELISAKit 人(UK)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAP試劑盒人牛小腸堿性0酸酶(CIAP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

干細(xì)胞熒光定性試劑盒20次

Humansolublemyosinheavychain1,sMHC-1ELISAKit人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IGFBP3重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 Protein

Melamine/OVA(ovalbumin 5mgMelamine/OVA(ovalbumin) 三聚胺與雞卵白蛋白偶聯(lián)物

AK4重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

GCSH Protein Human 重組人 GCSH 蛋白

CD24 Protein Mouse 重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Melamine/OVA(ovalbumin 5mgMelamine/OVA(ovalbumin) 三聚胺與雞卵白蛋白偶聯(lián)物

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IGFBP3重組食蟹猴 IGFBP3 蛋白 Protein

CD24 Protein Mouse 重組小鼠 CD24 / Ly-52 / CD24A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

AK4重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

人胃黏膜上皮細(xì)胞大鼠神經(jīng)蛋白聚糖(NCAN)試劑盒 ，英文名： NCAN ELISA Kit

Mouse cardiac oponin I (cTn- I) ELISA Kit 小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒

RatMyosinELISAKit 大鼠肌球蛋白(Myosin)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHB-Beta(HumanBeta-subunitsofhemoglobin)ELISAKit人血紅蛋白β亞基

細(xì)胞半胱蛋白酶-4(CASPASE-4)活性熒光定量試劑盒20次

RatVitaminC,VCELISAKit大鼠C(VC)試劑盒規(guī)格：96T/48T